Química

Bioquímica: Funciones. Aminoácidos. Propiedades de los aminoácidos. Enlace peptídico. Plegamiento de proteínas. Desnaturalización de proteínas.

PROTEINAS

Funciones

En general todas las de la célula:

- Catalizadores: aceleran las reacciones varios órdenes de magnitud.

- Estructural: gracias a su estructura fibrosa.

- Movimiento de las células: como es el caso de los músculos.

- Transmisión del impulso nervioso: el receptor es una proteína.

- Transporte: uniéndose a sustancias más pequeñas como la hemoglobina y el oxígeno.

- Almacén: en la hemoglobina el O es estable unido al Fe.

- Defensa: los anticuerpos son proteínas.

- Reguladores: regula expresión del DNA, tiene un papel importante en el crecimiento y diferenciación de las células.

Estructura

Son polímeros de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos. Algunas tienen entre 50 y 2500 aminoácidos. Como hay 20 aminoácido hay muchas variaciones: 20n donde n es el número de monómeros. Desde el punto de vista estructural lo más importante es que tiene estructura tridimensional. De todas las maneras posibles sólo se ordena de la forma que sea más estable termodinámicamente. Para que funcionen tienen que tener estructura tridimensional, estar en conformación nativa. La desnaturalización es la pérdida de estructura tridimensional, la cadena de aminoácidos está igual pero no funciona, está hidrolizada.

AMINOACIDOS

α -aminoácidos:

Son los monómeros constituyentes. En el carbono α tienen un grupo amino y un grupo carboxilo. El carbono es α porque está al lado del carbono más oxidado. Los otros 2 sustituyentes son un hidrógeno y una cadena lateral R. Como hay 20 R distintos hay 20 aminoácido diferentes. Según R el aminoácido tendrá unas propiedades u otras. A pH celular (7) el grupo carboxilo está disociado (implica carga negativa) y el amino protonado. Aunque R no interaccione con agua los otros grupos sí.

Cadenas laterales:

Apolares: no tienen tendencia a interaccionar con el agua iónicamente o por puentes de hidrógeno.

1- Cadena alifática: alanina, valina, leucina, isoleucina.

2- Anillo aromático: fenilalanina, triptófano.

3- Azufre en R: metionina

4- Prolina: La cadena lateral se une al grupo amino del aminoácido formando una anillo.

Polares: una cadena polar tiene grupos que interaccionan con el agua. A pH fisiológico pueden estar cargados o no.

No cargados:

- Glicina.

- Hidroxilo: serina, treonina, tirosina.

- Sulfhidrilo: cisteína, es importante porque sufre interacciones que no padece ningún otro, porque se puede establecer un puente bisulfuro entre las cadenas laterales.

- Amida: glutamina y asparagina. Son derivados de dos aminoácido ácidos (glutámico y aspártico).

Cargados negativamente:

Tienen una carga negativa en la cadena lateral. como tienen u grupo carboxilo son aminoácido ácidos.

- aminoácido ácidos: aspártico (β -carboxilo) y glutámico (γ -carboxilo).

Los amidas son amidas de éstos ácidos.

Cargados positivamente:

- Amino: lisina (ε -amino).

- Imidazol: histidina

- Guanidíneo: arginina (es el más fuerte como base, para disociarlo debe estar a pH 12 por lo que difícilmente pierde la carga positiva).

Estos aminoácido son codificables porque en el DNA existe información distinta para cada uno (están codificados en los codones). Otros aminoácido entran a formar parte de la proteína pero no son codificables y son modificaciones de los 20 aminoácido. Son derivados hidroxilados, en concreto hay 2 importantes: hidroxilisina e hidroxiprolina. Para que una proteína tenga hidroxilaciones el DNA pone el aminoácido y cuando ya forma parte de la cadena una enzima lo modifica (modificación post-traduccional). Además existen aminoácido no proteicos que no forman parte de las proteínas, cumplen funciones antibióticas, pared celular, transmisión del impulso nervioso... A veces ni siquiera son α -aminoácidos. La tiroxina es una hormona que es un derivado de la tirosina.

Propiedades de los aminoácidos

Todos menos la glicina tienen 4 sustituyentes distintos en el carbono α por lo que tienen un centro quiral y pueden existir en formas estereoisómeras (imágenes especulares), tienen actividad óptica y pueden ser levorrotatorios o dextrorrotatorios. Si hay otro carbono quiral habrán más estereoisómeros. Menos treonina e isoleucina los demás tienen sólo un carbono α . Para pasar de un configuración a otra se han de romper enlaces. Para distinguir la configuración alrededor del carbono α se les llama L y D. Colocando el grupo carboxilo en el centro si NH3 se queda a la derecha es D-aminoácido. Todos los aminoácido de las proteínas son L. Todas las moléculas que tienen formas estereoisómeras en la Naturaleza se presentan sólo en una forma. Si sintetizamos una mezcla de aminoácido habrán L y D al 50%. Pero como las moléculas han de encajar para reaccionar se ha escogido sólo la forma L. Sí existen D-aminoácido pero no forman parte de las proteínas.

Propiedades ácido base:

A pH fisiológico el grupo carboxilo está disociado y el amino tiene carga positiva. Puede actuar como ácido cediendo el grupo amino un protón y como base aceptándolo el grupo carboxilo. El estado de disociación depende del pH al que se encuentre la disolución y lo fuerte que sea el ácido,habiendo muy fuertes y muy débiles. Independientemente de la cadena lateral tienen 2 grupos disociables, el α -amino y el α -carboxilo. Para tener el aminoácido totalmente protonado el pH debe ser muy ácido. La tendencia a disociarse viene dada por el pK (pK más pequeño, ácido más fuerte). Como el carboxilo tiene pK más bajo que el amino se disocia antes. Al aumentar el pH se disocia primero α -carboxilo y luego el amino.

Curva de valoración:

Un aminoácido con dos grupos disociables presenta una curva de valoración con dos saltos. Hay una zona en la que el pH está amortiguado en torno al valor de pK, donde las concentraciones de ambas especies son comparables. Ecuación de Henderson-Hasselback:

Ecuación de Henderson-Hasselback

El primer punto de equivalencia es el punto isoeléctrico donde el aminoácido tiene carga eléctrica neutra, A tiene +1 y C -1. Cuando pH < pK predomina la forma no disociada.

Curva de valoración

Los aminoácido que tienen otro grupo disociable en la cadena lateral son los cargados. El aspártico y el glutámico tienen otro carboxilo:

Curva de valoración

→ pKACOOH →

H3N+

Curva de valoración

→ pK RCOOH →

Curva de valoración

H2N

Curva de valoración  

H3N+ - asp - COOH

pK α COOH

H3N+

COO‾

pK RCOOH

Cálculo del punto isoeléctrico:

Semisuma de los pK de los equilibrios que tiene a los dos lados la forma isoeléctrica, en este caso:

PI = (pKαCOOH + pKRCOOH)/2

pKs más usuales:

α -COOH: <3

α -N+H3: 4

Cadena lateral:

ε - N+H3: 10

COOH: 4

N+H3: 10

Imidazol: 6

Guanidíneo: 12

Tirosina: 10

Cisteína: 8.5

La histidina es el único aminoácido que es tampón a pH fisiológico porque se disocia.

Estado de disociación de un tripéptido:

Lys-Asp-His

Lys-Asp-His

PI = (Imidazol + α - NH3)/2

La solubilidad de una proteína es mínima en el punto isoeléctrico porque como las moléculas ya no se repelen se asocian formando agregados.

Enlace peptídico

Es de naturaleza covalente, por lo tanto muy estable. Se forma por condensación entre un α -COOH y el α -N+H3siguiente:

H3+N - CH - COO‾ + H3+N - CH - COO‾ → - CO - HN - .......

Es un enlace tipo amida en el que se pierde una molécula de agua. Al unir un tercer aminoácido se une igual, por lo que todos los α -COOH y α -NH3 están implicados en el enlace y dejan de ser operativos todos menos los dos de los extremos. Al α -NH3 del final de le denomina N-terminal y al α -COOH C-terminal. Los péptidos se ordenan representando primero al aminoácido que tenga el N-terminal libre. Si hay hasta 10 aminoácido se llama oligopéptido. Los polímeros son lineales, como no tienen más grupos para formar enlaces no se ramifican. A cada aminoácido se le llama residuo.

Nomenclatura de péptidos: Todos menos el último acaban en -il y el último permanece igual.

Características del enlace peptídico:

- El esqueleto covalente es siempre el mismo y sólo varían las cadenas laterales. También es importante la secuencia, el orden que llevan.

- ES más corto que un enlace sencillo pero más largo que uno doble, carácter parcial de doble enlace. Se suponen dos formas resonantes de enlace simple y doble:

Características del enlace peptídico

- Como es doble no puede girar en torno suyo. Sólo gira el enlace simple del C α, lo que da lugar a isómeros cis - trans de los cuales la forma más estable es la trans. La forma trans tiene un impedimento estérico. En la forma trans los C α están lo más alejados posible. Como el O es más electronegativo que el N el enlace está polarizado. El grupo NH del peptídico no se disocia a ningún pH. 2 grupos pueden formar parte de un puente de hidrógeno, el carbonilo (C=O) sería aceptor y el NH dador. El C del carbonilo tiene 3 sustituyentes dirigidos hacia los vértices de un triángulo en el mismo plano. De este modo, la cadena polipeptídica está formada por una serie de planos que giran alrededor de los C α . Plano rígido:

Características del enlace peptídico

NIVELES DE ORGANIZACION.
ESTRUCTURA PRIMARIA

La secuencia de aminoácidos en una cadena polipeptídica determina su estructura primaria. Esta secuencia se especifica por la información genética. La primera proteína cuya secuencia se descubrió fue la insulina.

ESTRUCTURA SECUNDARIA

Organización de la cadena polipeptídica en el espacio mantenida por puentes de hidrógeno entre los elementos del enlace peptídico (C=O y NH). Permite que la cadena adquiera dos tipos de estructura comúnmente: helicoidal (se enrolla como un cilindro alrededor de un eje) y laminar (plegada en forma de lámina). Se pueden encontrar en todos los tipos de proteínas. Las estructuras más estables y frecuentes son hélice α y hoja β (propuestas por Pauling y Corey).

Hélice α: hay 3.6 aminoácidos por cada vuelta, y cada vuelta tiene 5.4 ángstrom. Todas las cadenas laterales de los aminoácidos se quedan hacia fuera. Es muy frecuente porque es muy estable y es siempre dextrógira. esta estructura está estabilizada por muchos puentes de hidrógeno (el mayor número posible), todos los grupos carbonilo forman puente de hidrógeno con el tercer aminoácido tras él. Los enlaces de hidrógeno son paralelos al eje de la hélice por lo que la molécula no puede ser estirada. Hay proteínas que son α -hélice al 100% pero otras pueden presentar menor porcentaje o no presentar nada.

Aminoácidos incompatibles:

Hay aminoácidos incompatibles con esta estructura debido a las propiedades de su cadena lateral.

- El aspártico tiene la cadena lateral cargada por lo que si hay muchos juntos se repelen desestabilizando la molécula. Sólo son estables si no están disociados.

- Hay aminoácidos que son muy voluminosos en su carbono β porque están sustituidos y el residuo no puede extenderse. Son la treonina y la isoleucina.

- Hay otro aminoácido que rompe la α -hélice que es la prolina. Como el enlace no puede girar la cadena da la vuelta. Ya que tiene el grupo α -amino sustituido no puede formas puentes de hidrógeno. Se puede tener α -hélice antes y después de la prolina.

Una proteína puede tener α -hélice a lo largo de un trozo porque los aminoácidos son compatibles. La cadena se puede estirar rompiendo puentes de hidrógeno y el límite está en la cadena polipeptídica.

Hoja β u hoja plegada:

Estructura secundaria mantenida por puentes de hidrógeno entre elementos de la cadena peptídica. Aspecto laminar.

Diferencias con α -hélice:

- la cadena polipeptídica está lo más extendida posible.

- Distancia entre aminoácidos 3.5 ángstrom.

- Estructura mantenida por puentes de hidrógeno, pero en lugar de formar puentes entre elementos de la misma cadena es con elementos de cadenas distintas (o de la misma que da la vuelta). Los puentes de hidrógeno se establecen perpendiculares al eje de la lámina. Todos los carbonilo forman puentes de hidrógeno con los amino, por lo que es igual de estable que la α -hélice. Cuando hay 2 trozos existen 2 posibilidades:

- Si los 2 segmentos tienen direcciones distintas la hoja plegada es antiparalela. como los puentes de hidrógeno son enlaces direccionales es más estable.

- Si los 2 segmentos tienen direcciones iguales la hoja plegada es paralela.

Las cadenas laterales van por encima y por debajo alternativamente porque la configuración del enlace es trans.

PROTEINAS

- Las cadenas laterales están más próximas que en la α -hélice,por lo que sólo es compatible con aminoácidos de cadena lateral muy corta: glicina, alanina y serina (son los más pequeños). Los otros aminoácidos sufren repulsiones de tipo estérico. En realidad como la cadena está un poco retorcida cadenas más grandes caben.

Giro β:

Como la proteína se pliega sobre sí misma ha de cambiar de dirección y ser estable. De todos los giros éste es el más estable y frecuente. Es un elemento de estructura secundaria porque está estabilizado por puentes de hidrógeno entre el carbonilo y el amino del enlace peptídico. Está formado por 4 aminoácidos y estabilizado por un puente de hidrógeno formado entre el carbonilo del primer aminoácido y el amino del cuarto. Como hay poco espacio uno de los aminoácidos será pequeño, el tercero suele ser glicina y otro prolina, que tiene problemas de tipo estérico pero es el que se necesita para cambiar la dirección.

ESTRUCTURA SUPERSECUNDARIA

Asociaciones entre estructuras secundarias. Una hélice puede enrollarse con otra y formar una superhélice. También hay combinaciones de hélices y hojas plegadas. Como son muy frecuentes deben ser muy estables..

ESTRUCTURA TERCIARIA

Mantenida por interacciones de las cadenas laterales. Las cadenas polipeptídicas no se ordenan sólo en estructura de α -hélice porque se quedarían todas las cadenas laterales fuera y muchas son hidrófobas, lo que generaría inestabilidad, por lo que la proteína se pliega sobre sí misma dando lugar a una proteína compacta globular. Este plegamiento es complicado y sin simetría. La norma que rige el plegamiento es que se pliega para esconder los residuos hidrófobos del agua. En una proteína globular la mayoría de los aminoácidos hidrófobos están mirando hacia dentro para quedar excluidos,dejando fuera los residuos polares, por lo que la proteína es soluble. Si quedan residuos hidrófobos hacia fuera la proteína será menos soluble. La excepción son los residuos polares que la proteína guarda dentro para funciones específicas. Si la proteína debe meter muchos residuos hidrófobos protegidos, un trozo de esqueleto polipeptídico se queda mirando hacia dentro, con lo que sus grupos carbonilo y amino están en el interior, pero es más favorable que estén fuera. Esto se soluciona emparejando estos grupos que es lo que se consigue con la α -hélice y la β -hoja. Una proteína se pliega formando el mayor número de puentes de hidrógeno internos dentro de la cadena polipeptídica formados preferentemente entre elementos del enlace peptídico, por lo que la cadena será estable dentro de la proteína. Los grupos que puedan interaccionar con el agua se quedan hacia fuera, por lo que habrán muchas interacciones débiles con el agua participando las cadenas polares. Los elementos del enlace peptídico no interaccionan con el agua sino entre ellos.

Manutención de la estructura terciaria:

- Puentes de hidrógeno e interacciones iónicas entre las cadenas laterales.

- Fuerzas de Van der Waals: sólo cuando los residuos están muy cercanos, ya que esta interacción se da entre las partes hidrófobas escondidas dentro de la proteína.

- Puentes bisulfuro: únicamente entre las cadenas laterales de cisteínas. De todas las interacciones son las únicas covalentes.

Las cadenas laterales que interaccionan pueden estar muy alejadas entre sí en la cadena polipeptídica, cosa que no ocurre en la secundaria. Hay trozos de la proteína sin estructura porque aunque los aminoácidos sean compatibles no puede dar la vuelta y es necesario para la estructura final.

Proteínas en entorno hidrófobo:

Son las proteínas de la membrana que tienen aminoácidos con cadenas laterales hidrófobas, Presentan estructura en α -hélice para que todas las cadenas laterales estén hacia fuera.

Dominios estructurales:

Es un nivel de organización anterior a la estructura terciaria. Al observar una proteína globular plegada se ven distintas regiones bien definidas. Para que haya más de uno la proteína debe ser grande. Los dominios pueden ser iguales entre sí o distintos, se distinguen porque se ve una norma de plegamiento definida. Una proteína con dos dominios tiene dos regiones conectadas por un trozo de cadena polipeptídica (ambas regiones pertenecen a la misma cadena). Un dominio es como una etapa del plegamiento, el primer dominio adquiere su estructura antes de que el segundo esté sintetizado.

Las proteínas pueden tener varias cadenas polipeptídicas, reciben el nombre de oligoméricas y cada cadena es una subunidad.

ESTRUCTURA CUATERNARIA

Estudio de cómo se asocian las subunidades para dar la proteína funcional en la que todas las subunidades son importantes. Cada subunidad tiene su estructura terciaria. Las cadenas pueden ser iguales o distintas y a veces unas son funcionales y las otras reguladoras (para regular la actividad de la proteína). Las que mejor pueden regular su actividad son las oligoméricas.

Los grupos que participan en la estructura cuaternaria son los que han quedado hacia fuera. A veces no se esconden todos los grupos hidrofóbicos y así puede asociarse a otra subunidad. Las cadenas no se unen con muchos enlaces bisulfuro para no ser demasiado rígidas. La ventaja de las oligoméricas frente a las monoméricas es que frente a errores de transcripción aunque una subunidad no funcione no se pierde la funcionalidad de la proteína entera, disminuyendo el impacto de los errores.

EJEMPLOS DE PROTEINAS SEGUN SU ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL

PROTEINAS FIBROSAS

Aspecto de fibra, formadas por cadenas polipeptídicas paralelas en torno a un eje. Si los residuos son hidrófobos serán insolubles en agua. Su función es estructural, y si fueran solubles se desharían con el tiempo.

Queratina:

Forma parte de la piel y derivados (lana, uñas, pelo...). Según composición y propiedades hay 2 grupos:

1.- α -queratina: Tienen mucha cisteína que forma puentes bisulfuro. Cuanta más cisteína hay más dura es la proteína gracias a los enlaces covalentes. La α -queratina tiene un contenido muy alto en cisteína. Si no tiene muchos puentes bisulfuro se puede estirar porque su estructura es una α -hélice con los residuos hidrófobos hacia fuera y los aminoácidos incompatibles con la α -hélice no son frecuentes. Las α -hélices se asocian enrollándose una sobre otra en una estructura supersecundaria, sin plegarse sobre sí mismas. Cada microfibra está formada por 11 microfibrillas, 2 en el centro y 9 rodeándolas. Cada microfibrilla está formada por dos grupos de 2 α -hélices enrolladas hacia la derecha que se asocian enrollándose hacia la izquierda. Estas estructuras son estabilizadas por puentes de hidrógeno y las fibras se mantienen juntas por puentes bisulfuro.

2 -Fibroína: Algunas queratinas no tienen cisteína, pero tienen muchos aminoácidos de cadenas pequeñas como glicina, alanina y serina. Una estructura frecuente es que uno de cada dos sea una glicina:

Gly - Ala - Gly - Ser - Gly - Ala ...

La Fibroína adopta disposición de hoja plegada asociándose en láminas de hojas. No son extensibles. Las cadenas de aminoácidos son antiparalelas por lo que los puentes de hidrógeno son perpendiculares al eje de avance de la cadena y son más fuertes. Estructura secundaria, las cadenas laterales de los aminoácidos se quedan por arriba y por debajo de la hoja. Como uno de cada dos aminoácidos es glicina (su cadena lateral es un hidrógeno) al apilarse las hojas quedan huecos desiguales entre ellas. Las láminas se unen por interacciones de Van der Waals.

Colágeno:

Su cadena polipeptídica no se dispone ni en α -hélice ni en hoja plegada. Es muy importante cuantitativamente como es el caso de los mamíferos donde llega a ser el 30% de todas las proteínas. Está presente en todos los organismos pluricelulares. Tiene función estructural formando parte de huesos, tendones, cartílagos... Está formada por fibras paralelas y al microscopio electrónico se ven estrías transversales separadas unos 70 nm.

Composición en aminoácidos: es muy particular, pues ¹/3 de los aminoácidos son glicina y hay mucha alanina, además de otros raros en gran proporción como prolina y aminoácidos modificados (no codificables) como hidroxiprolina (Hyp) e hidroxilisina (Hyl). El 50% de las prolinas presentan hidroxilación en el C3 ó C4 y las lisinas en el C5. El OH sirve para establecer puentes de hidrógeno que estabilicen la estructura. También tiene azúcares unidos a la hidroxilisina (monosacáridos y disacáridos). Secuencialmente la glicina es uno de cada tres aminoácidos,lo que es imprescindible para la estructura del colágeno. Como también es rico en hidroxiprolina e hidroxilisina una secuencia típica es:

Gly - Pro - Hyp - Gly - X - Pro - Gly - Hyp - O - ....

Estructura tridimensional: La unidad estructural es una fibra de triple hélice enrollada hacia la derecha llamada tropocolágeno. Es una proteína de las más largas y estrechas mide unos 3000 ángstrom de largo y 15 de ancho. La triple hélice es un elemento de estructura secundaria mantenida por puentes de hidrógeno transversales al eje del tropocolágeno. Es muy estable y resistente. Tiene muchas prolinas e hidroxiprolinas que son aminoácidos de cadenas laterales grandes que rompen la α -hélice. Cada cadena tiene tres residuos por vuelta, estable por repulsiones de tipo estérico y las prolinas están lo más alejadas unas de otras. Cuando se asocian tres cadenas uno de los aminoácidos se tiene que quedar dentro, por eso hay tanta glicina. Se establecen puentes de hidrógeno entre grupos del enlace peptídico. La prolina no tiene dador porque la cadena vuelve a unirse al aminoácido. La cadena polipeptídica tiene cabeza y cola diferenciadas porque la secuencia de aminoácidos no permite adquirir estructura, como consecuencia el principio y el final de la triple hélice está un poco desordenado. Cuando se unen las cadenas se desplazan un poco unas sobre otras y al solaparse cabezas y colas se ven las estrías. Hay dos características que explican su gran estabilidad:

- Hay muchos aminoácidos hidroxilados que pueden aportar un OH extra para formar puentes de hidrógeno, sin los aminoácidos hidroxilados el colágeno es más frágil. La hidroxilación de la prolina se produce cuando ésta ya forma parte de la cadena gracias a la enzima hidroxilasa. Si ésta falla el colágeno será más frágil. El escorbuto es una carencia de vitamina C que forma parte de la composición de la hidroxilasa, al escasear produce fragilidad y consiguiente rotura de capilares. Hay enlaces covalentes cruzados entre la misma triple hélice o entre distintas que se establecen entre un residuos de lisina estando una de ellas oxidada por una oxidasa. El número de enlaces covalentes cruzados aumenta con la edad haciendo los huesos más quebradizos.

PROTEINAS GLOBULARES

Al medir volumen de la proteína y compararlo con el tamaño de su cadena polipeptídica se observa que están muy plegadas. Son solubles porque tienen los residuos hidrofóbicos escondidos del entorno acuoso y los polares fuera. Si pierden la estructura terciaria se desnaturalizan y ya no son funcionales ni solubles.

Mioglobina: su estructura fue propuesta por John Cowdery Kendrew. Tiene una propiedad especial que es la capacidad de unir O2 y almacenarlo de manera reversible. Como no hay ningún aminoácido capaz de unir O2 a su cadena lateral necesita un grupo prostético. Este grupo es de naturaleza no proteica y forma parte de la proteína para hacerla funcional. El de la mioglobina es un grupo hemo. La mioglobina tiene una alto contenido en α -hélice,hasta 8 tramos. Al plegarse lo hace manera que forma un bolsillo para el grupo hemo cerca de la superficie para que atrape el O2. Tiene sólo 2 residuos polares (histidina) que en lugar de estar fuera están dentro para unir el grupo hemo. Todos los enlaces peptídicos están en posición trans y es tan compacta que dentro sólo caben 4 moléculas de agua. También tiene prolina para darle la vuelta a la α -hélice. Como existe una relación directa entre la estructura de la proteína y su función las mioglobinas de organismos diferentes son muy parecidas, pero hay aminoácidos que cambian y otros no. No cambian los que son esenciales para la estructura tridimensional, pero hay otros que pueden ser sustituidos por otros de parecidas propiedades. Las dos histidinas son comunes a todas.

Proteínas globulares oligoméricas: la hemoglobina tiene 4 subunidades parecidas a la mioglobina (presenta estructura cuaternaria). Cada subunidad tiene estructura terciaria y se pliegan igual que la mioglobina y tienen un grupo hemo cada una. Para que sea funcional las 4 subunidades han de estar juntas porque si no se quedan con los residuos apolares hacia fuera.

Plegamiento de proteínas

El proceso de plegamiento es secuencial (la estructura se adquiere poco a poco) y cooperativo. Es cooperativo porque cuando se forma un elemento estructural se favorece la formación del siguiente. El esqueleto covalente tiene muchas posibilidades de ordenamiento espacial pero no se pliegan probando estructuras estables sino que cuando prueba a plegarse y encuentra un intermediario apropiado (un trozo bien hecho) se guarda y se va estabilizando por interacciones débiles. La principal directriz de una cadena es esconder los residuos hidrofóbicos. Luego debe adoptar la posición en que mayor número de puentes de hidrógeno pueda formar entre elementos del enlace peptídico. Las cadenas laterales hidrofílicas se dejan fuera para que formen puentes de hidrógeno con el agua. El plegamiento está condicionado por la secuencia de aminoácidos, la estructura se adquiere siempre espontáneamente por lo que es un proceso termodinámicamente favorecido (ΔG<0). Como ΔG=ΔH-TΔS,el factor entrópico se opone al ordenamiento pero gracias a todas las interacciones que se forman el factor entálpico lo compensa. La estructura final será la que más interacciones tenga aparte del enlace peptídico.

Desnaturalización de proteínas

Al modificar el entorno de la proteína podemos hacer que pierda su estructura tridimensional, desnaturalizándola, es decir, desplegando la cadena polipeptídica sin romper los enlaces peptídicos. Ahora la proteína será insoluble y no funcional. Para desnaturalizar una proteína se puede modificar el medio de varias maneras:

- Cambiando el pH cambia el estado de disociación de los grupos y las interacciones no se producirán.

- Aumentando la temperatura aumenta la agitación térmica que rompe los enlaces débiles.

- Añadiendo sustancias que formen muchos puentes de hidrógeno y compitan con el agua:

Urea
Urea: el NH2 es dador y el C=O aceptor

Cloruro de guanidíneo:

Cloruro de guanidíneo

- Añadiendo un detergente: La cola hidrofílica se mete dentro de la proteína y las cadenas laterales interaccionan con ella. El SDS, dodecilsulfato sódico, tiene una larga cadena hidrocarbonada y un grupo sulfato cargado.

En el puente bisulfuro los S están oxidados. Dos cisteínas se unen para formar una cistina:

Cys - S -- S - Cys

Estructura terciaria entre cadenas laterales. La proteína no se pliega buscando enlaces bisulfuros sino puentes de hidrógeno. Si al plegarse la proteína parta escondes los residuos hidrofóbicos dos cisteínas caen juntas se formará enlace bisulfuro. Los puentes bisulfuro que tenga una proteína no se deshacen con los métodos anteriores.

Para romperlo:

- Reducir el bisulfuro con un reductor. Es reversible. El agente reductor puede ser:

PROTEINAS

El mercaptoetanol se oxida y los SH de la proteína se reducen. Al añadir oxígeno se vuelven a formar.

- Acido perfórmico: el enlace se oxida completamente pasando a SO3‾ y la cisteína se convierte en ácido cisteico. No es reversible.

- ácido tricloroacético.

Hay que señalar que para romper los puentes bisulfuro hay que añadir antes urea porque pueden estar tan dentro de la molécula que el reactivo no llegue. Para eliminar la urea y el mercatoetanol se usa la diálisis. Esta consiste en la separación de moléculas en base a su tamaño mediante una membrana semipermeable. Se pone la disolución a separar en una bolsa de diálisis y se la rodea de un media sin reactivo, se establece el equilibrio trasvasando las moléculas pequeñas. Se va renovando el medio hasta la total extracción.

Experiencia de Anfinsen: Al principio se pensaba que la desnaturalización era irreversible, Christian B. Anfinsen experimentó con una proteína globular pequeña llamada ribonucleasa (RNasa). Esta proteína tiene unos 120 aminoácidos con 8 cisteínas que pueden formar 4 enlaces disulfuro. Anfinsen añadió urea 8 M y mercatoetanol a la ribonucleasa y la desplegó completamente anulando sus funciones biológicas. Al eliminar la urea y el mercatoetanol se volvieron a formar los puentes de hidrógeno y los bisulfuros, la estructura se rehizo y recuperó el 100% de su actividad biológica. Las conclusiones fueron:

- El plegamiento es espontáneo, por lo tanto es termodinámicamente favorable.

- la información sobre el plegamiento reside sólo en la cadena de aminoácidos.

Hay que tener en cuenta que en un experimento in vitro la concentración de proteínas es pequeña, pero en la célula es muy concentrada y el plegamiento es más eficaz porque hay proteínas que ayudan llamadas carabinas moleculares o chaperones y otras que rompen bisulfuros para que se plieguen bien.

Al poner mercaptoetanol y urea y eliminar ésta después por diálisis se recupera el 1% de actividad biológica. Esto es porque se forman todos los puentes bisulfuro posibles antes de que adopte su conformación. Si todos los bisulfuros son incorrectos se recuperaría el 0% de actividad, pero como algunos se establecen correctamente se recupera realmente el 1%. Para que la proteína sea totalmente funcional se promueve la ruptura de los bisulfuros con mercaptoetanol y se plegará. Luego se elimina.

Editor: Fisicanet ®

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